Khảo sát nấm mốc có khả năng phân giải cellulose thu nhận từ rừng Mã Đà, Đồng Nai

Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 63 
KHẢO SÁT NẤM MỐC CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI CELLULOSE 
THU NHẬN TỪ RỪNG MÃ ĐÀ, ĐỒNG NAI 
HỒ BẢO THÙY QUYÊN1,* 
PHẠM NGUYỄN PHƯƠNG THẢO2, NGUYỄN MỸ PHI LONG2 
1 Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh 
2 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG TP.HCM 
*Email: quyen.hbt@ou.edu.vn 
 (Ngày nhận: 28/07/2018; Ngày nhận lại: 13/09/2018; Ngày duyệt đăng: 15/10/2018) 
TÓM TẮT 
Rừng Mã Đà là một trong những khu bảo tồn quan trọng nhất tại Việt Nam, có thảm thực 
vật dày đặc. Đây là nguyên liệu cung cấp dinh dưỡng cho những nhóm nấm mốc có khả năng 
sinh tổng hợp enzyme cellulase, do hệ nấm mốc này tham gia vào chu trình carbon thông qua 
hoạt động phân giải cellulose. Nghiên cứu phân lập và giữ giống 220 chủng nấm mốc từ 6 mẫu 
đất thu tại các nơi khác nhau rừng Mã Đà (Đồng Nai). Định danh theo phương pháp so sánh hình 
thái được 19 chủng thuộc nhóm Aspergillus niger, 3 chủng thuộc Curvularia sp., 9 chủng thuộc 
Penicilium lilacinum, 2 chủng thuộc Penicilium sp.1, 3 chủng thuộc Penicilium sp.2, 3 chủng 
thuộc Penicilium sp.3, 2 chủng thuộc Penicilium sp.4, 1 chủng thuộc Penicilium sp.5, 3 chủng 
thuộc Penicilium sp.6, 3 chủng thuộc Penicilium sp.7 và 2 chủng thuộc Trichoderma sp. Khảo 
sát khả năng phân giải cellulose trên môi trường Czapek-Dox bổ sung 1% carboxyl methyl 
cellulose (CMC) cho thấy, tất cả các chủng nấm mốc này đều có khả năng phân giải cellulose. 
Trong đó các chủng có hoạt tính cellulase cao thuộc chi Penicilium. Kết quả của đề tài sẽ là tiền 
đề cho các nghiên cứu tiếp theo về đánh giá khả năng hoàn trả carbon cho tự nhiên của các hệ 
nấm mốc và thu nhận các chủng nấm mốc có hoạt tính cellulase cao để ứng dụng vào sản xuất. 
Từ khóa: Cellulase; Cellulose; Mã Đà; Nấm mốc. 
The investigation of fungi’s cellulose degradation. A study at Ma Da forest, Dong Nai 
ABSTRACT 
Ma Da forest is one of important natural reserves in Vietnam. Its vegetation is a nutritional 
supplement to filamentous fungi and cellulase production. The enzymatic systems of fungi that 
can degrade native cellulose play an important role in the cycle of carbon. This study isolated 
and maintained 220 varieties of mold from 6 different soil samples collected at from different 
places of Ma Da (Dong Nai). The identification method based on morphology identified 19 
strains of Aspergillus niger, 3 strains of Curvularia sp., 9 strains of Penicillium lilacinum, 2 
strains of Penicillium sp.1, 3 strains of Penicillium sp.2, 3 strains of Penicillium sp.3, 2 strains of 
Penicillium sp., 4 strains of Penicillium sp., 3 strains of Penicillium sp.6, 3 strains of Penicillium 
sp. 7 and 2 strains of Trichoderma sp. The investigation of cellulose degradation on Czapek-dox 
medium with 1% carboxyl methyl cellulose (CMC) showed that all fungi were capable of 
cellulose degradation, including the genus Penicillium with high cellulose activity. The results of 
the study will be the prerequisite for further studies of the assessment of mold systems’ ability to 
return carbon to nature and to obtain molds with high cellulase activity for production. 
Keywords: Cellulose; cellulase; Ma Đa; Mold. 
64 Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 
1. Giới thiệu 
Rừng Mã Đà hay “Khu bảo tồn thiên 
nhiên và di tích Vĩnh Cửu” là một trong 
những khu bảo tồn quan trọng nhất tại Việt 
Nam, có diện tích vùng là 68,368 ha và diện 
tích đất rừng khoảng 78,8% - 89,3% với độ đa 
dạng và phong phú cao (Nguyễn Xuân Quýnh 
và cộng sự, 2010). Vì vậy, Rừng Mã Đà là nơi 
dự trữ nguồn gen của nhiều sinh vật bao gồm 
các hệ động vật, thực vật và vi sinh vật. Hệ 
sinh thái rừng thường tạo ra một lượng lớn vật 
liệu hữu cơ dưới dạng lá, cành, hoa, quả, hạt 
(Tandel và cộng sự, 2009) nên một lượng lớn 
cellulose là thành phần chủ yếu của sinh khối 
thực vật chiếm 42-50% (Shields và cộng sự, 
1973; Binder và Raines, 2009) đã được tích 
trữ lại trong và trên mặt đất cung cấp nguồn 
dinh dưỡng cho hệ vi sinh vật trong đất, đặc 
biệt là các sinh vật có khả năng phân giải 
cellulose nhờ hệ enzyme cellulase ngoại bào 
có ở các nhóm nấm, vi khuẩn, xạ khuẩn, 
Ngày nay, cellulase đã và đang tiếp tục 
được sàng lọc với hy vọng thu nhận được 
nguồn enzyme có hoạt tính cao và ổn định 
(Sunna và cộng sự, 1997; Vieille and Zeikus, 
2001) nhằm phục vụ trong chuyển đổi sinh 
học các chất thải, trong công nghiệp dệt (Bhat, 
2000), công nghiệp giấy (Stork và cộng sự, 
1995; García và cộng sự, 2002), sử dụng trong 
sản xuất nhiên liệu sinh học (Lynd, 1999: 
Dale, 1999, Philippidis, 1994), chế biến thực 
phẩm như rượu bia, nước trái cây và nhiều 
lĩnh vực khác (Philippidis, 1994). 
Trong hệ sinh thái thảm mục rừng, nấm 
mốc là một trong những nhóm quan trọng vì 
chúng tham gia vào các chu trình tuần hoàn 
vật chất, chu trình carbon thông qua quá trình 
phân hủy chất hữu cơ từ lá và hình thành chất 
mùn (Lynd và cộng sự, 2002; De Bore và 
cộng sự, 2005; Ardhiani và cộng sự, 2013). 
Trong nghiên cứu của Sri và cộng sự đã thực 
hiện vào năm 2012 đã phân lập được chủng 
Aspergillus sp. từ thảm mục đất rừng với hoạt 
tính đạt 14.16 U/ml cellulase (Sri và cộng sự, 
2012). 
Nghiên cứu này khảo sát nấm mốc có khả 
năng phân giải cellulose ở rừng Mã Đà, Đồng 
Nai với mục tiêu xác định thành phần loài 
nấm mốc trong đất thu nhận từ rừng Mã Đà và 
khả năng phân giải cellulose của một số chủng 
phân lập được. Kết quả của nghiên cứu sẽ là 
tiền đề cho các nghiên cứu tiếp theo về đánh 
giá khả năng hoàn trả carbon cho tự nhiên của 
các hệ nấm mốc và thu nhận các chủng nấm 
mốc có hoạt tính cellulose cao để ứng dụng 
vào sản xuất. 
2. Vật liệu - Phương pháp 
2.1. Vị trí nghiên cứu và mẫu thu 
Vùng rừng Mã Đà thuộc huyện Vĩnh 
Cửu tỉnh Đồng Nai có tọa độ địa lí 11o08’41” 
- 11o32’16” Vĩ độ Bắc và 106o55’14” - 
107o35’20” Kinh độ Đông. Nơi đây có địa 
hình tương đối bằng phẳng, đồi thấp, dạng 
lượn sóng, thấp dần từ Bắc xuống Nam và từ 
Tây sang Đông, khí hậu nhiệt đới gió mùa cận 
xích đạo chia thành 2 mùa rõ rệt: mùa mưa và 
mùa khô. Nhiệt độ trung bình năm từ 25 - 
27oC, lượng mưa trung bình năm từ 2000 - 
2800 mm (Nguyễn Xuân Quýnh, 2010). 
Mẫu đất được thu theo phương pháp ngẫu 
nhiên trong rừng Mã Đà, gạt bỏ tầng thảm 
mục, thu 1kg đất ở lớp đất mặt, bảo quản 
trong túi zip có ghi các thông tin của mẫu. Tại 
phòng thí nghiệm, mẫu được để khô tự nhiên 
ở nhiệt độ phòng. Tiếp theo, mẫu được loại bỏ 
sỏi, đá và xác bã thực vật trước khi được 
nghiền và đồng nhất mẫu. Mẫu được giữ trong 
túi zipper có ký hiệu mẫu và bảo quản ở nhiệt 
độ phòng. 
2.2. Phương pháp phân lập mốc từ đất 
Các chủng nấm mốc được phân lập theo 
phương pháp pha loãng dãy nồng độ. 5g đất 
cho vào 45 ml nước muối 0,9% vô trùng, 
vortex ở 1200 vòng trong 5 phút để có được 
dịch đất pha loãng nồng độ 10-1, việc pha 
loãng được thực để đạt được 10-6. Hút 0,1 ml 
dịch đất pha loãng ở các nồng độ lên đĩa môi 
trường PDA có bổ sung kháng sinh 
Chloramphenicol (0,1g/ lít), mỗi nồng độ cấy 
2 đĩa, dùng que gạt thủy tinh vô trùng để dàn 
Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 65 
đều dịch cấy. Các đĩa này được ủ ở nhiệt độ 
phòng 2 - 3 ngày, quan sát và tách từng loại 
khuẩn lạc nấm mốc sang môi trường PDA, 
tiếp tục ủ từ 3 - 5 ngày. Các chủng mốc sau 
khi phát triển sẽ để giữ giống tạm thời ở 12oC 
cho các thí nghiệm tiếp theo. 
2.3. Phương pháp định danh nấm mốc 
bằng hình thái 
Quan sát hình thái khuẩn lạc 3 - 7 ngày 
tuổi, đối với các loài phát triển chậm cần thời 
gian lâu hơn, ghi nhận các đặc điểm: đường 
kính, màu sắc khuẩn lạc, dạng khuẩn lạc, giọt 
tiết, sắc tố tiết ra môi trường và các đặc điểm 
riêng khác. 
Để ghi nhận cấu trúc vi thể, khi khuẩn lạc 
có màu (có bào tử) đường kính đạt 0,5 - 1 cm, 
dùng dao mổ vô trùng cắt một bên khuẩn lạc 
theo hình chữ nhật kích thước 3 - 4 x 1,5 - 2 
cm, ủ 2 - 3 ngày và quan sát dưới kính hiển vi. 
Các chủng nấm mốc cũng được làm tiêu bản 
với thuốc nhuộm blue-coton lactophenol quan 
sát cấu trúc sinh sản của nấm mốc dưới kính 
hiển vi. Các chủng nấm mốc được quan sát 
cấu trúc vi thể ở vật kính 40x, 100x và được 
định danh dựa vào khóa phân loại của tác giả 
Đặng Vũ Hồng Miên (2015). 
2.4. Khảo sát khả năng phân giải 
cellulose của nấm mốc 
Cấy 1 điểm trên đĩa môi trường Czapek-
Dox bổ sung 1% carboxyl methyl cellulose 
(Cz + 1% CMC), ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 
ngày, thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Sau đó, 
nhỏ thuốc thử lugol lên bề mặt thạch để xác 
định khả năng phân giải cellulose của các 
chủng theo công thức D – d trong đó, D là 
đường kính vòng phân giải và d là đường kính 
khuẩn lạc. 
3. Kết quả và thảo luận 
3.1. Kết quả phân lập các chủng nấm 
mốc từ đất rừng 
Từ 6 mẫu đất được thu tại rừng Mã Đà 
(Đồng Nai) ký hiệu MD1, MD2, MD3, MD4, 
MD5, MD6, nghiên cứu đã phân lập được 220 
chủng nấm mốc. Số lượng chủng nấm mốc 
phân lập được của từng mẫu tương ứng là 31, 
54, 37, 37, 26, 35. 
3.2. Kết quả định danh các chủng nấm 
mốc bằng đặc điển hình thái 
Từ 220 chủng đã phân lập tiến hành định 
danh 63 chủng có sự hình thành bào tử, dựa 
theo khóa phân loại của tác giả Đặng Vũ 
Hồng Miên (2015). Kết quả định danh đến 
nhóm đối với chi Aspergillus và chi 
Penicillium, các chủng nấm còn lại được định 
danh đến chi bao gồm Curvularia và 
Trichoderma. 
Hình 1. Cấu trúc thành phần các chủng thuộc chi nấm mốc 
Aspergillus, Penicillium, Curvularia và Trichoderma. 
66 Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 
Bảng1 
Số lượng chủng nấm mốc phân lập được trong từng mẫu đất 
STT 
 Mẫu 
Nhóm 
MD1 MD2 MD3 MD4 MD5 MD6 TỔNG 
1 Aspergillus flavus 11 1 1 4 0 2 19 
2 Aspergillus niger 1 1 5 3 2 4 16 
3 Curvularia sp. 0 0 0 0 0 3 3 
4 Penicillium lilacinum 5 3 0 0 0 1 9 
5 Penicillium sp1. 2 0 0 1 0 0 3 
6 Penicillium sp2. 1 0 0 0 0 0 1 
7 Penicillium sp3. 0 0 3 0 0 0 3 
8 Penicillium sp4. 0 0 0 1 1 0 2 
9 Penicillium sp5. 0 0 0 0 0 1 1 
10 Penicillium sp6. 0 0 1 0 2 0 3 
11 Penicillium sp7. 0 0 1 0 0 0 1 
12 Trichoderma sp. 0 0 2 0 0 0 2 
Qua kết quả định danh cho thấy chi 
Aspergillus (56%) và Penicillium (36%) chiếm 
ưu thế so với các chi khác (Hình 1). Tuy 
nhiên, chi Penicillium (gồm 8 nhóm) có thành 
phần loại đa dạng hơn chi Aspergillus (chỉ có 
2 nhóm là A. flavus và A. niger). Đồng thời, 
các mẫu đất khác nhau thì số lượng và 
thành phần loài nấm cũng khác nhau. Chi 
Aspergillus có mặt ở tất cả các mẫu đất, nhưng 
các chi còn lại chỉ có ở một hoặc hai mẫu đất 
(Bảng 1). Điều này cho thấy có sự khác biệt về 
thành phần loài nấm ở các địa điểm khác nhau. 
Bảng 2 
Hình thái đại thể và vi thể của các chủng nấm mốc đã được định danh 
STT Nhóm 
Khuẩn lạc 
(A: mặt trên, B: mặt dưới) 
Vi thể 
1 
Aspergillus 
flavus 
Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 67 
2 
Aspergillus 
niger 
3 
Curvularia 
sp. 
4 
Penicillum 
lilacinum 
5 
Penicilium 
sp.1 
6 
Penicilium 
sp.2 
7 
Penicilium 
sp.3 
68 Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 
8 
Penicilium 
sp.4 
9 
Penicilium 
sp.5 
10 
Penicilium 
sp.6 
11 
Penicilium 
sp.7 
12 
Trichoderma 
sp. 
Vi thể: A. Mẫu tạo theo phương pháp cắt thạch (x100), B. Cấu trúc chổi (x400) 
C, D. Cấu trúc mang conidi (x1000) 
3.3. Kết quả hoạt tính phân giải 
cellulose của các chủng nấm mốc 
Chọn ngẫu nhiên 5 chủng trong nhóm A. 
flavus, 9 chủng trong nhóm A. niger, 3 chủng 
trong nhóm Curvularia và 2 chủng trong nhóm 
Trichoderma khảo sát khả năng phân giải 
cellulose. Sau 5 ngày nuôi cho kết quả 19 chủng 
này tuy không tạo được vòng phân giải xung 
quanh khuẩn lạc nhưng đều phát triển được trên 
môi trường khảo sát sử dụng cơ chất là CMC. 
Như vậy, các chủng này đều có khả năng phân 
giải cellulose nhưng hoạt tính không cao (Bảng 3). 
Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 69 
Bảng 3 
Khả năng phân giải của các chủng nấm mốc không tạo vòng phân giải sau 5 ngày nuôi 
STT Tên chi Khả năng phân giải 
1 Aspergillus 
A.flavus MĐ1A_8 A.niger MĐ4A_36 
2 Curvularia 
MĐ6A_14 MĐ6A_15 
3 Trichoderma 
MĐ3A_3 MĐ3A_22 
Đối với chi Penicillium nghiên cứu được 
thực hiện tương tự đối với 14 chủng trong đó 
có 5 chủng nhóm P. lilacinum, 1 chủng trong 
Penicilium sp.1, 1 chủng Penicillium sp.2, 1 
chủng Penicillium sp.3, 2 chủng Penicillium 
sp.4, 1 chủng Penicillium sp.5, 2 chủng 
Penicillium sp.6 và 1 chủng Penicillium sp.7. 
Kết quả khảo sát cho thấy tất cả các chủng 
thuộc chi Penicillium khảo sát đều phân giải 
được cellulose do chúng đều mọc được trên 
môi trường cơ chất CMC, nhưng các chủng 
khác nhau có khả năng phân giải cũng khác 
nhau. Cụ thể là các chủng P. lilacinum, 
Penicilium sp.3, Penicilium sp.4, và 
Penicilium sp7 không tạo được vòng phân giải 
quanh khuẩn lạc. Các chủng có vòng phân 
giải quanh khuẩn lạc là Penicillium sp.1 (D-d 
= 1,4cm), Penicillium sp.2 (D-d = 0,9cm), 
Penicillium sp.5 (D-d = 0,6cm), Penicillium 
sp.6 (D-d = 2cm) (Hình 2). 
70 Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 
Hình 2. Khả năng phân giải cellulose của các chủng Penicillium sau 5 ngày nuôi 
A. P. lilacinum B. Penicillium sp.1 C. Penicillium sp.2 
D. Penicillium sp.3 E. Penicillium sp.4 F. Penicillium sp.5 
G. Penicillium sp.6 H. Penicillium sp.7 
4. Kết luận 
Từ 6 mẫu đất thu tại các nơi khác nhau của 
rừng Mã Đà (Đồng Nai), nghiên cứu đã phân 
lập và giữ giống 220 chủng, định danh được 
19 chủng thuộc nhóm Aspergillus niger, 
3 chủng thuộc Curvularia sp., 9 chủng thuộc 
Penicilium lilacinum, 2 chủng thuộc 
Penicilium sp.1, 3 chủng thuộc Penicilium 
sp.2, 3 chủng thuộc Penicilium sp.3, 2 chủng 
thuộc Penicilium sp.4, 1 chủng thuộc 
Penicilium sp.5, 3 chủng thuộc Penicilium 
sp.6, 3 chủng thuộc Penicilium sp.7 và 2 chủng 
thuộc Trichoderma sp. Tất cả các chủng nấm 
mốc này đều có khả năng phân giải cellulose, 
trong đó một số chủng thuộc chi Penicilium có 
vòng phân giải cellulose rõ. Điều này chứng 
minh cho hệ nấm mốc tại rừng Mã Đà có khả 
năng hoàn trả carbon về cho chu trình tự nhiên, 
góp phần ổn định hệ sinh thái. Đồng thời 
các chủng Penicilium sp.1, Penicilium sp.2, 
Penicillium sp.5 và Penicillium sp.6 có hoạt 
tính phân giải cellulose cao, là những chủng 
tiềm năng cho việc thu nhận và sàng lọc chọn 
chủng để ứng dụng vào trong sản xuất 
Hồ B. T. Quyên và cộng sự. Tạp chí Khoa học Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, 62(5), 63-71 71 
Tài liệu tham khảo 
Ardhiani K. H., Nungki A. P., & Endang S. S. (2013). Role of bacteria and mold as agent plant 
litter composting, 3rd International conference on chemical, biological and environment 
sciences (ICCEBS'2013) January 8-9, Kuala Lumpur (Malaysia). 
Bhat, M.K. (2000). Cellulases and related enzymes in biotechnology. Biotechnol Adv 18, 355-383. 
Binder J. B., & Raines R. T. (2009). Simple Chemical Transformation of Lignocellulosic 
Biomass into Furans for Fuels and Chemicals. Journal of the American Chemical Society, 
131, 1979-1985. 
Dale, B.E. (1999). Biobased industrial products: bioprocess engineering when cost really counts. 
Biotechnology. Prog. 15, 775-776. 
De Boer, W., Folman, L.B., Summerbell, R.C., & Boddy, L. (2005). Living in a fungal world: 
impact of fungi on soil bacterial niche development. FEMS Microbiol., 29(4), 795-811. 
García, O., Torres, A.L., Colom, J.F., Pastor, F.I.J., Diaz, P., & Vidal, T. (2002). Effect of 
cellulase-assisted refining on the properties of dried and never-dried eucalyptus pulp. 
Cellulose, 9, 115-125. 
Lynd, L.R., Weimer, P.J., van Zyl, W.H., & Pretorius, I.S. (2002). Microbial cellulose 
utilization: fundamentals and biotechnology. Microbiol Mol Biol Rev, 66, 506-577. 
Lynd, L.R., Wyman, C.E., & Gemgross, T.U. (1999). Biochemical engineering. Biotechnology. 
Prog. 15, 777-793. 
Miên, Đ. V. H. (2015). Hệ nấm mốc ở Việt Nam, phân loại, tác hại, độc tố, cách phòng chống. 
Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, 608. 
Philippidis G.P. (1994). In Enzymatic Conversion of Biomass for Fuel Production, M.E. 
Himmel, Baker J.O. and Overend R.P. (eds.). Cellulase production technology, 188-217, 
ACS symposium series 566, USA. 
Quýnh, N. X, Nam, N. X, Đức, T. A., và Diệp, N. A. (2010). Nghiên cứu ảnh hưởng của chất 
độc da cam/Dioxin lên quá trình diễn thế các hệ sinh thái và sự biến đổi cấu trúc gen, 
protein của một số loài sinh vật tại khu vực Mã Đà (ĐTĐL.2007G/46). Báo cáo tổng hợp kết 
quả khoa học công nghệ. Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN. 
Shields J.A., Paul E.A., Lowe W.E., & Parkinson D. (1973). Turnover of microbial tissue in soil 
under fi eld conditions. Soil Biology & Biochemistry, 31-37. 
Sri Laksmi A, Narasimha G. (2012). Production of cellulases by fungal cultures isolated from 
forest litter. Annals of Forest Research, 55, 85-92. 
Stork, G., Pereira, H., Wood, T.M., Du¨sterho¨ft, E.M., Toft, A., & Puls, J. (1995). Upgrading 
recycled pulps using enzymatic treatment. TAPPI J, 78, 79-88. 
Sunna, A., Moracci, M., Rossi, M., & Antranikian, G. (1997). Glycosyl hydrolases from 
hyperthermophiles. Extremophiles, 1, 2-13. 
Tandel M.B., Kukadia B.N., & Kolambe Jadeja D.B. (2009). Influence of tree cover on physical 
properties of soil. Indian forester, 420-424. 
Vieille, C., & Zeikus, G.J. (2001). Hyperthermophilic enzymes: sources, uses, and molecular 
mechanisms for thermostability. Microbiol Mol Biol Rev, 65, 1-43.